鸡球虫病由艾美耳球虫感染引起，危害家禽养殖产业，药物防控仍是该病最主要的防控手段，但球虫广泛耐药以及现有抗球虫药作用分子机制解析不足，严重制约新型抗球虫药物研发。常山酮是来源于中药常山的喹唑啉酮类衍生物，对多重耐药球虫株仍具备良好药效，但该药物在柔嫩艾美耳球虫中的直接作用靶点尚不明确。

该研究采用简化热蛋白质组学联合沉淀辅助热蛋白质组学（STPP-PSTPP）策略，对常山酮处理后的柔嫩艾美耳球虫子孢子蛋白开展无标记全局靶标筛选；结合生物信息学分析、分子对接筛选得到 16 个候选互作蛋白，从中筛选排名前三的 U6L2Z8（EtPSD8，磷脂酰丝氨酸脱羧酶）、U6L2C0（EtPKA0，cAMP 依赖蛋白激酶催化亚基）、U6L6M2（EtCCT2，ATP 依赖分子伴侣）开展体外重组表达纯化。先后利用 CETSA-WB、差示扫描荧光（DSF）、表面等离子体共振 SPR 技术证实三者与常山酮存在直接、剂量依赖性结合，解离常数处于微摩尔级别。RT-qPCR 检测结果显示，常山酮处理可显著改变 3 个靶基因在球虫体内的 mRNA 转录水平，提示常山酮可能通过扰动靶基因转录，干扰球虫线粒体功能、激活磷酸化代偿信号通路，抑制球虫生长发育。

该研究首次建立抗球虫药体外靶蛋白筛选鉴定技术体系，实验确证 3 个常山酮全新直接作用靶点，填补了常山酮抗球虫分子机制研究空白，为后续寄生虫特异性药效团设计、新型抗球虫药物开发提供新思路。研究同时指出，本研究受球虫蛋白注释不全限制，靶蛋白在球虫完整生命周期中的生物学功能还需要 CRISPR-Cas9 基因编辑等手段进一步解析。

上海兽医研究所硕士研究生崔迎灿、华中农业大学联合培养硕士研究生王一涵为该论文共同第一作者，上海兽医研究所张可煜研究员为通信作者。该研究得到国家重点研发计划项目（2023YFD1800803）资助。

原文链接：https://doi.org/10.1016/j.jprot.2026.105753